ПРИЛОЖЕНИЕ 3
Обязательное
1. СРЕДА ЧАПЕКА-ДОКСА
1.1. В состав среды Чапека-Докса входят следующие реактивы:
калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,7 г;
калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный - 0 3 г;
магний сернокислый 7-водный - 0,5 г;
натрий азотнокислый - 2,0 г;
калий хлористый - 0,5 г;
железо (II) сернокислое 7-водное - 0,01 г;
сахароза - 30 г;
вода дистиллированная - до 1000,0 см.
1.2. Массы компонентов, указанные в п.1.1, последовательно растворяют в колбе с 500 см дистиллированной воды, тщательно перемешивают и добавляют дистиллированную воду до 1000 см.
1.3. рН питательной среды должен быть 6±0,5. При отклонении от заданного значения рН снижают до требуемого значения добавлением 0,01 моль/дм раствора соляной кислоты или повышают добавлением щелочей (едкого натра, гидроокиси калия).
2. СРЕДА ЧАПЕКА-ДОКСА С АГАРОМ
2.1. Среду готовят в соответствии с требованиями п.1.2, но без добавления сахарозы.
2.2. В раствор добавляют 20 г микробиологического агара и нагревают на водяной бане до полного расплавления агара. При нагревании колбу со средой взбалтывают.
2.3. В полученную однородную массу добавляют сахарозу и тщательно перемешивают содержимое колбы.
2.4. рН среды Чапека-Докса с агаром должен быть 6±0,5.
3. СРЕДА СУСЛО-АГАР
3.1. Неохмеленное пивное сусло разбавляют дистиллированной водой до содержания сахара от 5 до 6 °Б или 3,5 °Б. Содержание сахара определяют сахаромером. В разбавленное сусло добавляют 2% агара и содержимое колбы нагревают на водяной бане до полного его расплавления.
3.2. рН среды сусло-агар должен быть 6±0,5.
4. СРЕДА СУСЛО-АГАР С САХАРОЗОЙ
4.1. В неохмеленное неразбавленное сусло с содержанием сахара 16% добавляют 60% сахарозы, 2% агара и содержание колбы нагревают на водяной бане до полного расплавления агара.
5. СРЕДА САБУРО
5.1. 20 г микробиологического агара заливают 1000 см дистиллированной воды и нагревают на водяной бане до полного расплавления агара. Затем добавляют 40 г глюкозы и 10 г пептона.
6. КАРТОФЕЛЬНО-МОРКОВНАЯ СРЕДА
6.1. 200 г очищенного сырого картофеля и 200 г очищенной сырой моркови отваривают вместе в течение 1 ч в 1 дм водопроводной воды. Отвар процеживают через марлю в чистую колбу, доливают до 1 дм водопроводной водой и добавляют 20 г агара. Содержимое колбы нагревают на водяной бане до полного расплавления агара.
7. КАРТОФЕЛЬНО-ГЛЮКОЗНАЯ СРЕДА
7.1. 200 г очищенного картофеля отваривают в течение 1 ч в 1 дм водопроводной воды, отвар процеживают через марлю в сухую чистую колбу, доливают до 1 дм водопроводной водой, добавляют в отвар 20 г глюкозы и 20 г агара. Содержимое колбы нагревают на водяной бане до полного расппавления агара.
8. СТЕРИЛИЗАЦИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
8.1. Среды в расплавленном состоянии разливают в пробирки на их объема для последующего разлива в чашки Петри или на их объема для выращивания грибов в пробирках. Жидкие среды разливают в колбы. Пробирки и колбы закрывают ватными пробками и стерилизуют в автоклаве.
8.2. Среды, содержащие сахарозу и пивное сусло, стерилизуют при давлении 50 кПа в течение 20-30 мин, не содержащие сахарозу и пивное сусло - при давлении 100 кПа в течение 15-20 мин.
8.3. После стерилизации пробирки, заполненные на объема, размещают под углом 25°±5° к горизонтальной поверхности для получения скошенной поверхности при застывании среды.
8.4. Не допускается смачивать края пробирки и ватную пробку.